අල්ට්රා ෆිල්ටේෂන් කේන්ද්රාපසාරී නල භාවිතය සහ පූර්වාරක්ෂාව
1) සුදුසු ultrafiltration නලයක් තෝරන්න.UF පටල විවිධ රසායනික ද්‍රව්‍යවලට ඔරොත්තු දීමේ මට්ටමින් වෙනස් බව සලකන්න.සාමාන්‍යයෙන්, 35 kDa වැනි උනන්දුවක් දක්වන ප්‍රෝටීනයේ අණුක බරින් 1/3 ට වඩා වැඩි නොවිය යුතු අණුක බර කපා හැරීමක් සමඟ 10 kDa අණුක බර කපා හැරීමක් සහිත අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් ටියුබ් තෝරා ගත හැකිය.උනන්දුවක් දක්වන ප්‍රෝටීනයේ අණුක බර 10 kd පමණ වේ නම්, 3 KD අණුක බර කපා හැරීමක් සහිත අල්ට්රා ෆිල්ටේෂන් බටයක් භාවිතා කළ හැක.
(2) අලුතින් මිල දී ගත් අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් වියළි ය, භාවිතයට පෙර අල්ට්රා පිරිසිදු ජලය එකතු කර මිනිත්තු කිහිපයක් සඳහා පෙර සිසිල් කළ පටල, අයිස් ස්නානය හෝ ශීතකරණය හරහා ජලය සම්පූර්ණයෙන්ම ගමන් කරයි.එවිට ජලය වත් කරනු ලැබේ, එනම් ප්රෝටීන් දියර, සහ කොපමණ ප්‍රමාණයක් එකතු කරන්නේද, නළයේ මුදුනේ ඇති සුදු රේඛාවට වඩා වැඩි නොවේ.මෙහෙයුම සැහැල්ලු වන අතර, ප්රෝටීන් ද්රාවණය එකතු කිරීමට පෙර ultrafiltration නළය අයිස් මත පෙර සිසිල් කිරීම අවශ්ය වේ.
3) ස්කන්ධය සහ ගුරුත්වාකර්ෂණ කේන්ද්‍රය යන දෙකම සමතුලිතතාවයට ළඟා විය යුතුය.භ්‍රමණ වේගය සහ ත්වරණය ඉතා වේගවත් නොවන බව සලකන්න, එසේ නොමැතිනම් ultrafiltration membrane වලට සෘජුවම හානි කරයි.කේන්ද්රාපසාරී අල්ට්රා පෙරීම ආරම්භ කරන ලදී (කේන්ද්රාපසාරී අංශක 4 දක්වා පෙර සිසිල්).විවිධ කේන්ද්රාපසාරී වල RPM g බවට පරිවර්තනය වූ පසු එය වෙනස් විය.කේන්ද්රාපසාරී ත්වරණය අවම වශයෙන් සකස් කර ඇති අතර, පටලය මත පීඩනය අඩු විය.සටහන, කේන්ද්රාපසාරී එහි ගමනාන්ත වේගයට ළඟා වූ පසු කේන්ද්රාපසාරී හැර යාමට වග බලා ගන්න, නැතහොත් ඔබට ගැටලුවක් ඇත්නම්, ඔබට එය පළමු වරට හැසිරවිය නොහැක.ස්පින්ඩලයට පටලයේ දිශානතිය උපදෙස් අනුව සකස් කර ඇත (කෝණික කේන්ද්රාපසාරී නඩුව පටලය අක්ෂයට ලම්බක වේ).ප්‍රායෝගික භාවිතයේදී, සාමාන්‍ය භ්‍රමණ වේගය උපදෙස් වලට වඩා අඩු වන අතර එමඟින් කේන්ද්රාපසාරී නලයේ ආයු කාලය දීර්ඝ කළ හැකිය.
3) ස්කන්ධය සහ ගුරුත්වාකර්ෂණ කේන්ද්‍රය යන දෙකම සමතුලිතතාවයට ළඟා විය යුතුය.භ්‍රමණ වේගය සහ ත්වරණය ඉතා වේගවත් නොවන බව සලකන්න, එසේ නොමැතිනම් ultrafiltration membrane වලට සෘජුවම හානි කරයි.කේන්ද්රාපසාරී අල්ට්රා පෙරීම ආරම්භ කරන ලදී (කේන්ද්රාපසාරී අංශක 4 දක්වා පෙර සිසිල්).විවිධ කේන්ද්රාපසාරී වල RPM g බවට පරිවර්තනය වූ පසු එය වෙනස් විය.කේන්ද්රාපසාරී ත්වරණය අවම වශයෙන් සකස් කර ඇති අතර, පටලය මත පීඩනය අඩු විය.සටහන, කේන්ද්රාපසාරී එහි ගමනාන්ත වේගයට ළඟා වූ පසු කේන්ද්රාපසාරී හැර යාමට වග බලා ගන්න, නැතහොත් ඔබට ගැටලුවක් ඇත්නම්, ඔබට එය පළමු වරට හැසිරවිය නොහැක.ස්පින්ඩලයට පටලයේ දිශානතිය උපදෙස් අනුව සකස් කර ඇත (කෝණික කේන්ද්රාපසාරී නඩුව පටලය අක්ෂයට ලම්බක වේ).ප්‍රායෝගික භාවිතයේදී, සාමාන්‍ය භ්‍රමණ වේගය උපදෙස් වලට වඩා අඩු වන අතර එමඟින් කේන්ද්රාපසාරී නලයේ ආයු කාලය දීර්ඝ කළ හැකිය.
(4) ඉතිරි 1ml ට සාන්ද්රණය කළ විට, බෆර ද්‍රාවණයේ 50ul ගෙන, 10ul ප්‍රවාහය එකතු කර, අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් බටයේ ප්රෝටීන් නොමැති දැයි විනිශ්චයක් ලෙස නිල් පැහැයක් තිබේදැයි බලන්න.නළය කාන්දු වී ඇත්නම්, අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් ආරම්භ කිරීම සඳහා ඉහළ ස්ථරය නැවත වත් කර නව නලයකට ගලා යන්න.නල මඟ හැරී ඇත්ද යන්න නිශ්චිතවම තීරණය කිරීම සඳහා, ප්රෝටීන් මැලියම් මත ධාවනය කිරීමට පෙර BSA 5mgml සමඟ මිනිත්තු 10ක් කේන්ද්රාපසාරී කරන්න, ප්රෝටීන් මැලියම් මත ධාවනය කරන්න, හෝ Bradford බොරතෙල් විශ්ලේෂණය, සහ ඉතිරි සාන්ද්‍රිත ප්රෝටීන් ද්රාවණය (අයිස් මත ක්‍රියා කරන සහ ප්‍රෝටීන රත් වීම වළක්වන) එකතු කිරීමෙන් දිගටම කරගෙන යන්න. සියලු සාන්ද්රණය එකතු කර ඇත.ප්‍රෝටීන වල වර්ෂාපතනය සිදු වුවහොත්, නල වැසීමට හේතු වේ නම් කේන්ද්රාපසාරී කිරීමේදී ප්‍රවේශම් වන්න.වර්ෂාපතනය සිදුවන්නේ නම්, වර්ෂාපතනයේ නිශ්චිත හේතුව අධික ප්රෝටීන් සාන්ද්රණයක් හෝ නුසුදුසු බෆරයක්ද යන්න තීරණය කරන්න;පළමුවැන්න බහු අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් ටියුබ් එකවර අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් කිරීමෙන්, සාන්ද්රණය අඩු කිරීමෙන් සහ දෙවැන්න ප්රෝටීන් වර්ෂාපතනයක් සිදු නොවන තෙක් විවිධ බෆර විසඳුම් හුවමාරු කිරීමෙන් විසඳිය හැකිය.
(4) ඉතිරි 1ml ට සාන්ද්රණය කළ විට, බෆර ද්‍රාවණයේ 50ul ගෙන, 10ul ප්‍රවාහය එකතු කර, අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් බටයේ ප්රෝටීන් නොමැති දැයි විනිශ්චයක් ලෙස නිල් පැහැයක් තිබේදැයි බලන්න.නළය කාන්දු වී ඇත්නම්, අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් ආරම්භ කිරීම සඳහා ඉහළ ස්ථරය නැවත වත් කර නව නලයකට ගලා යන්න.නල මඟ හැරී ඇත්ද යන්න නිශ්චිතවම තීරණය කිරීම සඳහා, ප්රෝටීන් මැලියම් මත ධාවනය කිරීමට පෙර BSA 5mgml සමඟ මිනිත්තු 10ක් කේන්ද්රාපසාරී කරන්න, ප්රෝටීන් මැලියම් මත ධාවනය කරන්න, හෝ Bradford බොරතෙල් විශ්ලේෂණය, සහ ඉතිරි සාන්ද්‍රිත ප්රෝටීන් ද්රාවණය (අයිස් මත ක්‍රියා කරන සහ ප්‍රෝටීන රත් වීම වළක්වන) එකතු කිරීමෙන් දිගටම කරගෙන යන්න. සියලු සාන්ද්රණය එකතු කර ඇත.ප්‍රෝටීන වල වර්ෂාපතනය සිදු වුවහොත්, නල වැසීමට හේතු වේ නම් කේන්ද්රාපසාරී කිරීමේදී ප්‍රවේශම් වන්න.වර්ෂාපතනය සිදුවන්නේ නම්, වර්ෂාපතනයේ නිශ්චිත හේතුව අධික ප්රෝටීන් සාන්ද්රණයක් හෝ නුසුදුසු බෆරයක්ද යන්න තීරණය කරන්න;පළමුවැන්න බහු අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් ටියුබ් එකවර අල්ට්රා ෆිල්ටරේෂන් කිරීමෙන්, සාන්ද්රණය අඩු කිරීමෙන් සහ දෙවැන්න ප්රෝටීන් වර්ෂාපතනයක් සිදු නොවන තෙක් විවිධ බෆර විසඳුම් හුවමාරු කිරීමෙන් විසඳිය හැකිය.
(5) පළමු පියවර කිහිපය ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය කිරීමට භාවිතා කරන අතර, බෆරය වෙනස් කිරීමට අවශ්ය නම්, සම්පූර්ණ ප්රෝටීන් වලින් 1ml පමණ නව බෆරයක් (0.22um ultrafiltration membrane හරහා ultrafiltration) මෘදු ලෙස එකතු කරන්න, සහ තුනකට 1ml පමණ නැවත සාන්ද්රණය කරන්න. අපේක්ෂිත ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය මත පදනම්ව, සාමාන්‍යයෙන් 500ul ට නොවැඩි, නමුත් 200ul දක්වා, අවසාන සාන්ද්‍රිත අවසාන පරිමාව සමඟ අඛණ්ඩව.සෑම අවස්ථාවකම අවම වශයෙන් 10 × හෝ ඊට වැඩි පරිමාවකින් ගණනය කරන ලද පරිදි, අත්‍යවශ්‍යයෙන්ම බොහෝ බෆර වෙනස් කිරීම සඳහා අවස්ථා තුනකදී 1000 × හෝ ඊට වැඩි ප්‍රමාණයක් ලබා ගන්න.
(5) පළමු පියවර කිහිපය ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය කිරීමට භාවිතා කරන අතර, බෆරය වෙනස් කිරීමට අවශ්ය නම්, සම්පූර්ණ ප්රෝටීන් වලින් 1ml පමණ නව බෆරයක් (0.22um ultrafiltration membrane හරහා ultrafiltration) මෘදු ලෙස එකතු කරන්න, සහ තුනකට 1ml පමණ නැවත සාන්ද්රණය කරන්න. අපේක්ෂිත ප්රෝටීන් සාන්ද්රණය මත පදනම්ව, සාමාන්‍යයෙන් 500ul ට නොවැඩි, නමුත් 200ul දක්වා, අවසාන සාන්ද්‍රිත අවසාන පරිමාව සමඟ අඛණ්ඩව.සෑම අවස්ථාවකම අවම වශයෙන් 10 × හෝ ඊට වැඩි පරිමාවකින් ගණනය කරන ලද පරිදි, අත්‍යවශ්‍යයෙන්ම බොහෝ බෆර වෙනස් කිරීම සඳහා අවස්ථා තුනකදී 1000 × හෝ ඊට වැඩි ප්‍රමාණයක් ලබා ගන්න.
පසු කාලය: නොවැම්බර්-09-2022