PCR පරීක්ෂණ වලදී බහුලව භාවිතා වන එන්සයිම කිහිපයක්

පොලිමරේස් දාම ප්‍රතික්‍රියාව, කෙටියෙන්PCRඉංග්‍රීසියෙන්, විශේෂිත DNA කොටස් විස්තාරණය කිරීමට භාවිතා කරන අණුක ජීව විද්‍යා තාක්‍ෂණයකි.එය ශරීරයෙන් පිටත විශේෂ DNA අනුකරණයක් ලෙස සැලකිය හැකි අතර එමඟින් DNA ඉතා කුඩා ප්‍රමාණයක් විශාල ලෙස වැඩි කළ හැකිය.සමස්ත කාලය තුළPCRප්‍රතික්‍රියා ක්‍රියාවලියේදී එක් ද්‍රව්‍ය පන්තියක් වැදගත් කාර්යභාරයක් ඉටු කරයි - එන්සයිම.

1. Taq DNA

මුල් දිනවල අත්හදා බැලීම් වලදීPCR, විද්‍යාඥයන් Escherichia coli DNA පොලිමරේස් I භාවිතා කරන ලදී, නමුත් මෙම එන්සයිමයේ ගැටලුවක් තිබේ: එය චක්‍රයක් සිදු කරන සෑම අවස්ථාවකම නව එන්සයිම නැවත පිරවීමට අවශ්‍ය වන අතර එමඟින් මෙහෙයුම් පියවර තරමක් සංකීර්ණ වන අතර එය සම්පූර්ණයෙන්ම ස්වයංක්‍රීයව විස්තාරණය කිරීමට අපහසු වේ.විද්‍යාඥයන් විසින් 1988 දී Thermus aquaticus වෙතින් Taq DNA පොලිමරේස් අහම්බෙන් හුදකලා කිරීමෙන් පසුව මෙම ගැටළුව විසඳා ඇත. එතැන් පටන් DNA ස්වයංක්‍රීයව වර්ධක කිරීම යථාර්ථයක් බවට පත් විය.මෙම එන්සයිමය සොයා ගැනීම ද සිදු කරයිPCRතාක්ෂණය පහසු, ප්රායෝගික සහ විශ්වීය තාක්ෂණයකි.දැනට, ටක් ඩීඑන්ඒ පොලිමරේස් යනු ඩීඑන්ඒ කට්ටලවල බහුලවම ඇති පොලිමරේස් වේ.

2. PfuDNA

ඉහත සඳහන් කළ පරිදි, Taq DNase හි විශාල දෝෂයක් ඇත, එබැවින් නොගැලපීම හේතුවෙන් නිශ්චිත නොවන විස්තාරණය වැළැක්වීම සඳහා විද්‍යාඥයන් Taq DNA පොලිමරේස් යම් ප්‍රමාණයකට වෙනස් කර ඇති අතර, එහි ප්‍රතිඵලයක් ලෙස සාවද්‍ය පරීක්ෂණ ප්‍රතිඵල ඇති විය.නමුත් Taq DNA පොලිමරේස් වෙනස් කිරීම මගින් කාමර උෂ්ණත්වයේ දී DNA පොලිමරේස් වල ක්‍රියාකාරිත්වය අඩාල කළ හැක.PfuDNA පොලිමරේස් Taq DNA පොලිමරේස් හි ඉහත අවාසි සඳහා මනාව සකසා ගත හැකි අතර, PCR ප්‍රතික්‍රියාව සාමාන්‍ය පරිදි සිදු කළ හැකි අතර, ඉලක්කගත ජාන වර්ධකයේ සාර්ථකත්ව අනුපාතය ඵලදායී ලෙස වැඩිදියුණු කළ හැක.

3. Reverse Transscriptase

ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම 1970 දී සොයා ගන්නා ලදී. මෙම එන්සයිමය RNA අච්චුවක් ලෙස ද, dNTP උපස්ථරයක් ලෙස ද භාවිතා කරයි, පාද යුගල කිරීමේ මූලධර්මය අනුගමනය කරයි, සහ 5′-3′ දිශාවට RNA අච්චුවට අනුපූරක DNA තනි පොටක් සංස්ලේෂණය කරයි.ප්‍රතිලෝම පිටපත් කිරීම මූලික වශයෙන් DNA හෝ RNA සැකිලි වලින් DNA පොලිමරේස් ක්‍රියාකාරකම් මත රඳා පවතින අතර එබැවින් 3′-5′ exonuclease ක්‍රියාකාරකම් නොමැත.කෙසේ වෙතත්, එහි RNase H ක්‍රියාකාරකම් ඇත, එය ප්‍රතිලෝම ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් සංශ්ලේෂණ දිග යම් ප්‍රමාණයකට සීමා කරයි.වයිල් රිවර්ස් ට්‍රාන්ස්ක්‍රිප්ටේස් හි අඩු විශ්වාසවන්තභාවය සහ තාප ස්ථායීතාවය හේතුවෙන් විද්‍යාඥයින් ද එය වෙනස් කරන ලදී.

සදහාPCRඅත්හදා බැලීම්, ප්‍රධාන පරිභෝජන ද්‍රව්‍ය වනුයේ: තනි PCR නල, 4/8-තීරු PCR නල, PCR තහඩු.

Labio ගේPCR පරිභෝජන භාණ්ඩපහත සඳහන් දේ ඇතවාසි:

PCR තහඩු: පුළුල් තාප සයිකල් අනුකූලතාව;ඉහළ පරස්පර, පහසුවෙන් හොඳින් හඳුනාගැනීම;හොඳින් ප්‍රතිදීප්ත පරාවර්තනය;හොඳයිතාප හුවමාරුව;සහතික කළ DNase, RNase, DNA, PCR නිෂේධක, සහ පයිරොජන්-නිදහස් පරීක්ෂා කරන ලදී.

තනි PCR නල: වාෂ්පීකරණයට ඔරොත්තු දෙන;හොඳයිතාප හුවමාරුව;විශිෂ්ට දෘශ්‍ය පැහැදිලිතාව; සහතික කළ DNase, RNase, DNA, PCR නිෂේධක, සහ පයිරොජන් රහිත පරීක්ෂාවට ලක් කරන ලදී.

4/8 තීරු PCR නල: අතිශය තුනී බිත්ති;ඉහළ පැහැදිලි බව, හොඳ ප්‍රතිදීප්ත පරාවර්තනය;ඖෂධ කර්මාන්තය, ආහාර කර්මාන්තය සහ අණුක ජීව විද්‍යාව සඳහා භාවිතා කළ හැකිය; උසස් තත්ත්වයේ, වර්ජින් පීපී ද්‍රව්‍ය; සහතික කළ DNase, RNase, DNA, PCR නිෂේධක, සහ පයිෙරොජන්-නිදහස් පරීක්ෂා කරන ලදී.